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斑貼試驗(yàn)的規(guī)范步驟技巧學(xué)習(xí)一下

更新時(shí)間:2023-03-28瀏覽:476次

  斑貼試驗(yàn)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,主要用于鑒定細(xì)菌的血清學(xué)分類和鑒別。在斑貼試驗(yàn)中,通過將一種特定的血清涂在細(xì)菌表面上,觀察細(xì)菌與血清反應(yīng)的情況,來推測(cè)細(xì)菌的種類和特性。本文將詳細(xì)介紹其步驟。
 
  一、實(shí)驗(yàn)器材
 
  首先需要準(zhǔn)備的是實(shí)驗(yàn)器材。主要有以下幾種:
 
  1.試管:用于懸浮細(xì)菌。
 
  2.離心管:用于進(jìn)行離心。
 
  3.離心機(jī):用于離心。
 
  4.滴定針:用于取樣。
 
  5.試驗(yàn)板:用于固定細(xì)菌。
 
  6.無毒性普魯士藍(lán)鹽酸鹽:用于檢測(cè)斑點(diǎn)。
 
  7.脫氧膽酸:可使細(xì)菌細(xì)胞壁破裂,釋放抗原。
 
  8.磷緩沖液:用于稀釋抗原和血清。
 
  9.乳化器:用于使血清與抗原混合。
 
  10.洗滌緩沖液:用于清洗試驗(yàn)板。
 
  11.組織塊刀:用于切取細(xì)菌。
 
  二、實(shí)驗(yàn)步驟
 
  1.準(zhǔn)備工作
 
  a.準(zhǔn)備細(xì)菌液:用熒光顯微鏡檢測(cè)活菌及其腫脹度,將細(xì)菌懸浮在磷緩沖液中,搖勻后離心,取上清液。
 
  b.制備抗原液:將細(xì)菌取上清液和脫氧膽酸混合,振蕩。
 
  c.制備血清液:從鑒定正常動(dòng)物、正常人或鑒定過該種病菌的患者的全血中,經(jīng)離心制成的腫脹度合適的血清。
 
  注:處理時(shí)注意消毒,防止污染。
 
  2.制備孔板
 
  取一張孔板,加入一個(gè)滴定單位(約30微升)的抗原液到每個(gè)孔中,等孔板干燥好。
 
  3.孔板實(shí)驗(yàn)
 
  a.采用或制備的抗血清,加入各個(gè)孔中,干燥后在37℃溫箱中孵育。
 
  b.在隔夜培養(yǎng)的試驗(yàn)菌中,PDA或NA培養(yǎng)基上切取一枚直徑約2毫米細(xì)菌菌落,用滴定針在孔中放入一滴解膠體滴定溶液,壓在菌落上壓一下。
 
  c.將孔板保持在水平面上,用細(xì)胞培養(yǎng)箱中備好的恒溫環(huán)境下,孵育24小時(shí)。
 
  d.將孔板用無毒性普魯士藍(lán)鹽酸鹽染色,觀察每個(gè)孔的反應(yīng)情況。
 
  4.結(jié)果判定
 
  反應(yīng)陰性的孔,一個(gè)小的斑貼點(diǎn)也沒有,可認(rèn)定此菌株不與該抗血清反應(yīng)。
 
  反應(yīng)陽(yáng)性的孔,有一個(gè)小的斑貼點(diǎn)出現(xiàn),應(yīng)當(dāng)作為深入研究的對(duì)象。
 
  總之,斑貼試驗(yàn)是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法,可用于確定細(xì)菌種類和特性,從而指導(dǎo)臨床治療和疾病控制。實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單,但是需要注意消毒衛(wèi)生和實(shí)驗(yàn)器材的準(zhǔn)備工作,以獲得準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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